* افزودن ۲۵ گرم نمونه به ۲۲۵ میلی m.TSB یا m.EC(حاوی نووبیوسین) گرمخانه گذاری در ۳۷-۳۵ درجه به مدت ۲۴ ساعت

* کشت خطی بر SMAC agar و گرمخانه گذاری در ۳۷-۳۵ درجه به مدت ۲۴ ساعت که رنگ کلونی E.coli O157 بیرنگ-کرم-زرد(به علت عدم تخمیر سوربیتول) و رنگ سایر E. coli :قرمز شده

* بررسی عدم وجود آنزیم glucuronidase :

* انتقال کلونی های سوربیتول منفی به محیط کشت حاوی glucuronide مانند TBX agar ( Tryptone Bile X Glucuronide):کلونی های کرم رنگ یا محیط کشت حاوی MUG یا 4-mehtylumbelliferyl-B-D-glucuronide :کلونی های غیر فلورسنت

* انجام تستهای بیو شیمیایی و سرولوژیکی

General characteristics: Gram-negative, very slender, curved rods. Catalase-positive, but are micro-aerophilic and optimum growth is achieved in an atmosphere containing 5% oxygen and 10% carbon dioxide. Oxidase-positive. Do not attack sugars. Motile. The optimum temperature for growth for the thermophilic campylobacters is 42?C, and they do not grow at temperatures below 30C.Colonies are flat, droplet-like, glistening and tend to spread along the direction of the steak on moist agar. Older colonies become white to salmon-coloured. The colonies have a very characteristic odour

تصویر 1

تصویر 2

Phase contrast - Campylobacter coli
Phase contrast - Campylobacter jejuni
Phase contrast - Campylobacter lari
Gram stain 

۱) انتقال ۱ میلی از رقت ۰.۱ یا رقت مورد نیاز به پلیت خالی

۲) افزودن ۱۵ میلی TBX agar و پورپلیت ۱ لایه ای ( Tryptone Bile X- glucoronide)

۳) گرمخانه گذاری به مدت ۴ ساعت در دمای ۳۷-۳۰ درجه و سپس ۲۰ ساعت در دمای ۴۴ درجه

۴) شمارش کلونی های سبز-آبی

تصویری از کلنی های E.coli

General characteristics: Gram-negative cocci. Catalase- and oxidase-positive. Does not attack sugars.Small to medium-sized grey colonies

تصویر 1

تصویر 2

Phase contrast
Gram stain

باسیل گرم منفی  که تستهای اوره آز - اندول - متیل رد -KCN -آن مثبت  و تست سیترات در این باکتری منفی است .ضمن اینکه باکتری قادر به سوارمینگ  نمی باشد.

توجه شود که اعضای اوره آز مثبت خانواده آنتروباکتریاسه شامل :کلبسیلا پنومونیه -اوکسی توکا - آنتروباکتر آگلومرنس - پروتئوس و مورگانلا مورگانی می باشند.

 General characteristics: Gram-negative. Catalase- and oxidase-positive. Motile. Does not attack sugars. Obligately aerobic.Small to medium sized, grey colonies

تصویر 1

تصویر 2

Phase contrast
Gram stain

۱)۱۰ میلی از رقت ۰.۱ نمونه جامد به ۱۰ میلی LST broth با غلظت دو برابر دارای دورهام, يا ۱ میلی از نمونه مایع به ۱۰ میلی LST broth با غلظت معمولى داراى دورهام, ۴۸-۲۴ ساعت در ۳۷ درجه

۲) درصورت مشاهده گاز, ۲-۱ قطره به ۱۰میلی BG broth با غلظت معمولى ۴۸-۲۴ ساعت در بن ماری ۴۵-۴۴ درجه

۳) درصورت مشاهده گاز, ۲-۱ قطره به Tryptone water ۴۸-۲۴ ساعت در بن ماری۴۵-۴۴ درجه

۴) افزودن معرف کواکس, مشاهده حلقه قرمز رنگ در سطح

۵) کشت خطی از  BG broth حاوى گاز بر روى Mc-Conkey agar جهت ايجاد کلنی ايزوله

۶) کشت IMViC و TSI بر روى کلوني هاى مشكوك

این باکتریها بصورت باسیلهای گرم منفی ومتحرکی هستند که به خوبی در محیطهای آزمایشگاهی پرورش می یابند ودارای کپسول کوچکی می باشند وکلنیهای آن دارای پیگمان سفید - صورتی ویا قرمز بوده و معمولا در شرایط اتاق قادر به تولید پیگمان می باشند و پیگمان قرمز در سطح محیط مولر هینتون بهتر مشاهده می شود.همچنین ماده رنگی آن به نام پرودیزوزن یا پیریمین نامیده می شود.

این باکتری را می توان از عفونتهای ریوی -ادراری وخون جدا کرده و کشت آنها بوی ماهی یا ادرار می دهد.

در بین سراشیاها - مارسنس ازاهمیت بالایی برخورداربوده که این باکتری قادر به تخمیر مالتوز - مانیتول و سوکروز می باشد.سیترات مثبت واندول-اوره آز- متیل رداکتازSH2 و منفی است و بدلیل وجود پیگمان در سراشیا مارسنس مورد استفاده در تشخیص ذرات گرد و غبار هوا بوده.

 General characteristics: Gram-positive, long rods with a diameter < 0.9 µm. Catalase-positive. Attacks sugars by fermentation. Motile

Initially the colonies are small and mucoid, but quickly become medium-sized. The surface of the colonies dries out and become wrinkled. Underneath, the surface the colonies may be mucoid or dry. The colonies adhere to the agar and appear brownish or greenish, although the wrinkles are lighter in colour

تصویر 1

تصویر 2

Phase constrast

۱) تعداد باکتريها بيش از ۱۰۰ در میلی یا گرم از نمونه:

* افزودن ١ میلی از رقت ۰.۱ نمونه جامد يا ۱ میلی از نمونه مایع به پلیت خالی استریل

* افزودن ۲۰-۱۵ میلی VRB Agar يا Mc-Conkey Agar و کشت به صورت پورپليت دولايه ای

* گرمخانه گذارى در ۳۷-۳۵ به مدت ۴۸-۲۴ ساعت در خصوص لبنيات دمای ۳۰ درجه به مدت ۲۴ ساعت

* به طورهمزمان, افزودن ۱۰ میلی از رقت ۰.۱ نمونه جامد به لوله حاوی ۱۰ میلی BG broth با غلظت دو برابر دارای دورهام یا ۱ میلی از نمونه مایع به ۱۰ میلی  BG broth با غلظت معمولى داراى دورهام ۴۸-۲۴ ساعت و در ۳۷-۳۵ درجه

* درصورت مشاهده گاز در لوله BG broth شمارش کلوني هاى قرمز ارغوانی در پلیتها

* درصورت ايجاد کدورت بدون گاز کشت خطی از لوله فوق روی محيط Mc- Conkey آگاربرای بررسی کلنی موجود

* cfu/g = عكس حجم x عكس رقت x تعداد کلونى قرمز

۲) (روش MPN) تعداد باکتريها از ۱۰۰-۱ در میلی یا گرم از نمونه:

* طبق روش MPN با استفاده از محيط کشت انتخابی اوليه Tryptose Broth Lauryl Sulfate و جهت تائيد محيط کشت انتخابی BG broth می باشد

General characteristics: Gram-positive, spore-forming rods. Catalase-positive. Normally motile, although often slow. Attacks glucose by fermentation.The form of Bacillus cereus colonies varies depending on strain. Generally large colonies with a dull or frost-glass surface and undulate margin

تصویر 1

تصویر 2

Phase contrast - long chain
Phase contrast - numerous chains
Phase contrast - colony formation
Gram stain 

۱) افزودن ١ میلی از نمونه مايع به لوله حاوی ۱۰ میلی Lauryl sulfate tryptose broth با غلظت معمولی يا ۱۰ میلی از رقت ۰.۱ نمونه جامد به لوله حاوی ۱۰ میلی Lauryl sulfate tryptose broth با غلظت دو برابر

۲) گرمخانه گذارى در ۳۷-۳۵ به مدت ۴۸-۲۴ ساعت

۳) درصورت عدم مشاهده گاز در لوله پس از ۴۸ ساعت نمونه از نظر وجود کلی فرم منفی است.

۴) درصورت مشاهده گاز در لوله پس از ۴٨ ساعت انتقال ١تا ٢ قطره از محتويات لوله به ۱۰ میلی

 General characteristics: Gram-positive. Catalase-negative. Non-motile. Attacks sugars by fermentation, but the reaction is weak.Blood Agar plate which has been incubated with 5% carbondioxide for 24 hours. Small, grey-white, convex colonies

تصویر 1

تصویر 2

تصویر 3

Gram stain 

 تشخیص آزمایشگاهی: اشیریشیا کولی كوكوباسيل گرم منفي  بوده که می توان از خون- مدفوع- خلط- چرک -مایع نخاع -ادرار وزخم جدا نمود کلی باسیل ، گرم منفی، بیهوازی اختیاری و بدون اسپوری بوده که درسطح آگار خوندار رشد می کند و کلنی های کروی محدب به رنگ خاکستری تولید ...

تعداد باکتريها بيش از ۱۰۰ در میلی یا گرم از نمونه:

General characteristics: Gram-negative. Catalase- and oxidase-positive. Non-motile. Attacks sugars by fermentation. Some strains produce a brown water-soluble pigment

تصویر ۱ 

Phase contrast
Gram stain 

۱) افزودن ١ گرم نمونه جامد يا ١ میلی از نمونه مایع به ۱۰ میلی آب پپتونه بافره

۲) گرمخانه گذاری در دمای ٣۵ تا ٣٧ درجه به مدت ٢٠-۱۶ ساعت

۳) افزودن۱ میلی از سوسپانسیون فوق به لوله حاوی ۱۰ میلی EE Broth (Enterobacteriacea Enrichment Broth) دارای لوله دورهام یا Brilliant Green Bile Glucose Broth) BGBG Broth) با غلظت معمولی و داراىلوله دورهام, ٢۴-۱۸ ساعت در ۳۷-۳۵ درجه

۴)پس از گرمخانه گذاری ، از لوله های فوق کشت خطی روی محيط انتخابی

۵) گرمخانه گذارى در۳۷- ٣۵ درجه به مدت ٢۴ ساعت در خصوص لبنیات دمای ۳۰ درجه در  ۲۴ ساعت

۶)کشت خطی کلنی های قرمز يا ارغوانی با هاله رسوبی قرمز روی محيط کشت نوترينت آگار گرمخانه گذارى در ۳۷-۳۵ درجه به مدت ۲۴ ساعت 

انجام آزمون های تاييدی آنتروباکترياسه برای کلنی های رشد کرده کاملا مجزا